RNA电穿孔高效转染原代淋巴细胞：使用体外转录的mRNA通过电穿孔可以实现高基因转染效率和低转染相关毒性。例如，在用GFP或mCD62L转染的受激原代人和鼠T淋巴细胞中观察到90％以上的转基因表达和80％以上的活细胞。GFPRNA对未刺激的人PBMC或鼠脾细胞进行电穿孔，分别产生95％和56％的GFP⁺细胞。此外，基因表达迅速且持久，对经过RNA电穿孔的T淋巴细胞未观察到不良影响7。五、优化共转染方法整合共转染和平行共转染：研究不同的共转染和连续转染方法，特别是体外转录信使RNA（IVTmRNA）。对于在纳米载体形成之前预混合的IVTmRNAs（整合共转染）和同时用单独形成的纳米载体转染细胞（平行共转染），分析决定共转染效率的定量参数。同时递送siRNA和mRNA也表明整合方法的比较高共转染效率，但由于两个**运营实体的峰值输出在动力学上不同，连续交付的效率比较高。纳米颗粒可以参与内体途径，并可以通过细胞质将DNA运输到细胞核。广东DNA转染试剂
RNA转染试剂是一类能够将RNA分子导入细胞内的物质，其作用原理主要涉及以下几个方面。利用电荷相互作用：许多RNA转染试剂是阳离子性的，它们可以与带负电荷的RNA分子通过静电相互作用结合形成复合物。例如，鱼精蛋白是一种天然阳离子肽混合物，由于相反电荷驱动的耦合作用，被用于细胞内核酸的递送8。鱼精蛋白不仅可以保护RNA免受生物系统中的降解，还能增强其对细胞的穿透能力。阳离子脂质体也是常见的转染试剂之一。以LipofectamineTM2000为例，它可以介导携带绿色荧光蛋白基因的真核表达载体转染至鸡成骨细胞9。阳离子脂质体通过其阳离子头部与RNA的负电荷相互作用，形成脂质体-RNA复合物，然后通过与细胞膜的融合或内吞作用将RNA导入细胞内。内吞作用途径：一些RNA转染试剂通过内吞作用进入细胞。如合成的8-mer两亲性反式多聚2'-O-甲基尿苷硫代磷酸三酯RNA元件（2'-OMeUtaPS），它能介导将不带电荷的聚A尾磷酸二酰胺基吗啉代序列（PMO）高效递送至HeLapLuc705细胞或肌管肌肉细胞。已确定大胞饮作用是HeLapLuc705细胞中使用的主要内吞途径。广东DNA转染试剂在大肠杆菌细胞中复制的质粒通常含有二核苷酸频率为1:16的CpG基序，这与细菌DNA中的频率相似。
对于容易转染的贴壁细胞如人胚肾细胞（HEK293）和人宫颈*细胞（HeLa），脂质体转染效率相对较高。这些细胞具有较强的内吞能力，能够有效地摄取脂质体-核酸复合物。例如，在标准的转染条件下，HEK293细胞的转染效率可以达到50%-70%。而对于一些难转染的贴壁细胞，如原代肝细胞和某些神经细胞，其转染效率较低。这是因为它们的细胞膜结构比较复杂，可能存在较厚的糖萼或者紧密的细胞间连接，阻碍了脂质体-核酸复合物的进入。例如，原代肝细胞的转染效率可能只有10%-20%。
一般来说，贴壁细胞对脂质体的耐受性相对较好。但是，在高浓度脂质体转染的情况下，即使是耐受性好的细胞也会受到影响。例如，HeLa细胞在高浓度脂质体转染时，可能会出现细胞膜完整性受损，表现为细胞内乳酸脱氢酶（LDH）释放增加，细胞的代谢活动也会受到一定程度的干扰。对于难转染的贴壁细胞，由于其本身比较脆弱，较低浓度的脂质体也可能产生明显的细胞毒性。比如原代神经细胞，脂质体可能会破坏其精细的神经突起结构，影响细胞的正常生理功能。
转染试剂用量：转染试剂的用量是影响转染效率的重要因素之一。过多或过少的转染试剂都可能导致转染效率降低。在阳离子脂质体Lipofectamine2000对PC12细胞的转染实验中，发现lipo2000用量为5μL，DNA2μg，转染时间为6h时，PC12细胞转染率高达40%，且未影响细胞的正常分泌3。在脂质体介导法转染肿瘤细胞效率的优化实验中，研究了细胞接种密度、DNA用量、脂质体与DNA的比例等因素对脂质体转染效率的影响。结果表明，2-5次细胞传代，2×105接种密度、4μgDNA用量、2.5:1的脂质体与DNA比例、30min脂质体-DNA复合物形成时间以及6h细胞与复合物孵育时间，转染效率比较高**估转染效率至关重要，特别是在需要高转染效率以保证特定下游靶标转录后调控的功能研究中。
其他转染试剂：机制概述：例如CALNPRNAi转染试剂，其转染机制可能与传统转染试剂不同。该试剂转染效率***高于传统转染试剂，同时毒性比较低。其具体转染机制可能涉及对RNA的摄取、细胞利用率及细胞毒性的综合作用。在不同细胞类型中的表现：目前文献中未明确提及CALNPRNAi转染试剂在特定细胞类型中的具体表现，但研究表明该试剂为难转染细胞的RNA干扰带来了新的选择7。综上所述，不同RNA转染试剂在不同细胞类型中的转染机制存在差异，这些差异主要表现在与RNA的结合方式、进入细胞的途径以及在细胞内的释放和作用方式等方面。了解这些差异对于选择合适的转染试剂进行特定细胞类型的RNA转染实验具有重要意义。基于病毒的转染，或者更具体地称为转导，涉及使用病毒载体将特定的核酸序列带入宿主细胞。广东DNA转染试剂
随着寡核苷酸生物合成产业的发展，不同类型的修饰寡核苷酸也被引入市场，以提高小RNA寡核苷酸转染的效率。广东DNA转染试剂
考虑实验目的和应用场景不同的实验目的和应用场景可能需要不同类型的转染试剂。***应用：如果转染试剂用于基因***或药物研发等应用，那么需要选择具有良好生物相容性和安全性的试剂。在安全有效的递送mRNA使用改性PEI基脂质聚合物的研究中，探索了All-Fect和Leu-FectC作为新型转染试剂，这些试剂具有优异的生物相容性、高效的递送能力和强大的溶酶体逃逸能力，可直接增加mRNA稳定性并促进高效基因翻译，适用于基因***等应用4。基础研究：对于基础研究实验，可能更注重转染效率和实验的可重复性。在不同转染方式用于modRNA转染人脂肪干细胞的初步研究中，比较了不同转染方式的转染效率和蛋白表达情况，以及在体内促进血管再生的效果，为基础研究提供了参考10。综上所述，选择**适合的RNA转染试剂需要综合考虑转染效率、细胞毒性、RNA需求、血清兼容性、多因子转染能力以及实验目的和应用场景等多个因素。在选择转染试剂时，可以参考已有的研究文献，进行预实验以评估不同试剂的性能，并根据实验需求和条件选择**合适的转染试剂。广东DNA转染试剂
