准备试剂：准备 PCR 反应所需的各种试剂，包括 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、缓冲液、引物、Mg²⁺等。引物是决定 PCR 特异性的关键因素，需根据待检测的转基因成分的特定基因序列设计合成特异性引物。配置反应液：按照一定的比例和顺序，将各种试剂加入到无菌的 PCR 管中，配置成 PCR 反应体系。一般反应体系包括 10×PCR 缓冲液、2.5mmol/L dNTPs、25mmol/L MgCl₂、10μmol/L 引物、5U/μL Taq DNA 聚合酶以及适量的模板 DNA，总体积通常为 20μL 或 50μL。RePure-T配备了三槽设计，允许用户在同一次实验中同时进行多个反应。南京定量基因扩增仪PCR仪哪个好
引物设计与条件优化场景：新引物开发时，需测试不同退火温度（Tm 值）以避免非特异性扩增。例：针对某基因设计 5 对引物，通过梯度 PCR 同时测试每对引物在 55℃~65℃范围内的比较好退火温度，直接筛选出特异性条带**亮的组合。优势：传统方法需多次**实验，梯度 PCR *需 1 次运行即可完成多条件验证。复杂模板的扩增优化场景：扩增富含 GC 碱基对（>70%）的模板、长片段 DNA（>5kb）或存在二级结构的序列时，需精细优化温度参数。例：扩增某病毒全基因组（约 15kb）时，通过梯度功能测试不同延伸温度（如 68℃~72℃）对产物完整性的影响，确定比较好延伸条件。南京梯度基因扩增仪PCR仪RePure-(D)B利用梯度功能进行温度梯度设计，能够快速找到适合的反应温度，提高PCR反应效率。
实验效率与合规性：1. 程序编辑与数据管理操作界面是否支持触摸屏或电脑端远程控制，能否存储自定义程序（如保存不同实验的温度循环参数）；数据导出功能：是否支持 PDF、Excel 格式报告生成，便于实验记录和合规审计（如临床检测需符合 GMP 标准）。2. 安全与合规性临床用 PCR 仪需具备医疗器械注册证（如 NMPA 认证），科研用仪器需符合 CE、FDA 等国际标准；部分机型内置热盖（105℃），防止冷凝水影响反应体系，避免产物污染。选型决策流程明确**需求：先确定 “是否需要梯度功能”“样本通量多大”“是否需定量”；技术参数对标：重点关注温控精度、均匀性、升降温速率；成本与场景匹配：科研选梯度 + 低通量，临床选高通量 + 合规机型，野外选便携 + 集成化；品牌与服务验证：参考用户评价，对比售后响应速度与培训支持。
启动反应与结果分析确认参数无误后，启动 qPCR 程序，仪器自动运行并实时显示荧光曲线。反应结束后，通过软件查看结果：定量结果：根据标准曲线计算未知样本的初始模板浓度（定量），或通过 ΔΔCt 法分析相对表达量（相对定量）。溶解曲线：若出现单一尖锐峰，说明扩增特异性良好；若有杂峰，需排查引物或反应条件问题。 污染防控（重点）核酸污染：严格分区操作：将试剂配制区、样本处理区、PCR 扩增区分开，避免交叉污染。使用滤芯吸头，每次加样后更换吸头，避免移液器接触样本或试剂瓶口。定期用 10% 次氯酸钠或 DNA 酶清洁实验台面、移液器和仪器样品槽，紫外灯照射消毒操作区（30 分钟以上）。试剂污染：试剂分装保存（避免反复冻融），阴性对照（无模板）和空白对照（无菌水）必须设置，以监测是否污染。RePure-A即时获取实时数据，增强了实验的可控性和数据可靠性。
仪器维护每次使用后，清洁样品槽内的液滴或杂质（用无尘纸蘸 75% 酒精擦拭），防止腐蚀或影响温度均匀性。长期不用时，定期开机运行空程序，避免部件老化；仪器出现异常（如温度失控、荧光信号异常）时，及时联系维修，勿自行拆解。实验设计合理性对照设置：必须包含阴性对照（已知阴性样本）、空白对照（反应体系，无模板），确保结果可靠性。重复设置：每个样本至少做 3 次生物学重复和技术重复，减少实验误差。循环次数：避免循环次数过多（超过 45 次），否则可能导致非特异性扩增，影响定量准确性。RePure-(D)B梯度功能的应用为实验提供了更多可能性和选择，使实验设计更加灵活多样。江苏三槽基因扩增仪PCR仪厂家
RePure系列PCR仪采用了梯度温控技术，能够在实验中准确调节温度梯度，可以轻松地优化PCR反应条件。南京定量基因扩增仪PCR仪哪个好
食品与食品安全：从源头到餐桌的监控：1. 微生物污染检测场景：生鲜食品中沙门氏菌（invA 基因）、李斯特菌（hlyA 基因）的快速检测，确保冷链食品安全。技术价值：相比传统培养法（需 48-72 小时），PCR 可在 4-6 小时内完成检测，适用于批量样本应急筛查（如食物中毒事件溯源）。2. 成分溯源与防伪场景：肉类制品中物种成分鉴定（如扩增细胞色素 b 基因区分猪、牛、羊肉）、蜂蜜中植物源 DNA 检测（区分槐花蜜与其他蜜种）。技术价值：防止掺假（如马肉冒充牛肉），维护品牌信誉（如地理标志产品的 DNA 指纹认证）。南京定量基因扩增仪PCR仪哪个好
