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探针基本参数
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用此探针在DNA文库中筛选,阳性克隆即是目标蛋白的编码基因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织有所不同。真核基因中含有非编码的内含子序列,而原核则没有。因此,真核基因组DNA探针用于检测基因表达时杂交效率要明显低于cDNA探针。DNA探针(包括cDNA探针)的主要优点有下面三点:①这类探针多克隆在质粒载体中,可以无限繁殖,取之不尽,制备方法简便。②DNA探针不易降解(相对RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移,随机引物法,PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。原子序数12至22的元素要在真空下进行成分测定,原子序数12以内的元素需要增添一些特殊设备才能分析。松江区品牌探针按需定制

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电子探针X射线显微分析仪(简称电子探针)利用约1Pm的细焦电子束,在样品表层微区内激发元素的特征X射线,根据特征X射线的波长和强度,进行微区化学成分定性或定量分析。电子探针的光学系统、真空系统等部分与扫描电镜基本相同,通常也配有二次电子和背散射电子信号检测器,同时兼有组织形貌和微区成分分析两方面的功能。电子探针的构成除了与扫描电镜结构相似的主机系统以外,还主要包括分光系统、检测系统等部分。电子探针主要由电子光学系统(镜筒),X射线谱仪和信息记录显示系统组成。电子探针和扫描电镜在电子光学系统的构造基本相同,它们常常组合成单一的仪器。长宁区特制探针按需定制电子探针是法国制成的,是在1949年用电子显微镜和X射线光谱仪组合而成。

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为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如*知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。

电子探针又称微区X射线光谱分析仪、X射线显微分析仪。其原理是利用聚焦的高能电子束轰击固体表面,使被轰击的元素激发出特征X射线,按其波长及强度对固体表面微区进行定性及定量化学分析。主要用来分析固体物质表面的细小颗粒或微小区域,**小范围直径为1μm左右。分析元素从原子序数3(锂)至92(铀)。***感量可达10-14至10-15g。近年形成了扫描电镜-显微分析仪的联合装置,可在观察微区形貌的同时逐点分析试样的化学成分及结构。广泛应用于地质、冶金材料、水泥熟料研究等部门。如图《电子探针示意图》所示。还能全自动进行批量(预置9999测试点)定量分析。

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基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩瀚的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以**是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。DNA探针根据其来源有3种:一种来自基因组中有关的基因本身,称为基因组探针(genomic probe);另一种是从相应的基因转录获得了mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNA探针(cDNA probe)。与基因组探针不同的是,cDNA探针不含有内含子序列。此外,还可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段,称为寡核苷酸探针。1953年前苏联制成了X射线微区分析仪,以后英、美等国陆续生产。宝山区标准探针品牌

2019年曝光的WiFi探针技术,甚至无需用户主动连接WiFi即可捕获个人信息。松江区品牌探针按需定制

缺口平移法是**常用的探针标记法,反应体系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三种三磷酸脱氧核糖核苷酸、一种同位素标记的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如图1。首先用适当浓度的DNA酶I在探针DNA双链分子上随机切开若干个缺口(不是切断DNA或将其降解),然后再借助于DNA聚合酶I的5 '→3'的外切酶活性,切去5’末端的核苷酸;同时又利用该酶的5’→3’聚合酶活性,使32P标记的互补核苷酸补入缺口.DNA聚合酶I的这两种活性的交替作用,使缺口不断向3’的方向移动,DNA链上的核苷酸不断为32P标记的核苷酸所取代。由于反应体系中含有同位素标记的单核苷酸,使新合成的链带有同位素标记,所以缺口平移实际上是同位素标记的核苷酸取代了原DNA链中不带同位素的同种核苷酸。松江区品牌探针按需定制

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