上海正规无血清细胞冻存液销售厂家

以前在另一家实验室的时候，冻存细胞根本就没有讲究这些标准操作。冻存的细胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纤维细胞）、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。将细胞酶消化后直接参与离心，加入冻存液（含90%的血清和10%的DMS0)，直接放在-80℃冰箱。两三天后移入液氮中，较久保存，几年后细胞的活力仍没有什么受损，照常能复苏，成活率高。但有三点须注意：（1）一是细胞的生长状态要好，不能长得过稀，同样也不能过密，细胞的状态看起来相当健康。70%密度的要保存的细胞须再长24h才能全满，万一细胞状态不好，可以酶消化后再繁殖一次；（2）冻存细胞的量要留心，不能太密也不能太稀，一般1OOmm培养皿的细胞冻存为3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的时间不能过长，一两天后转移到液氮罐里。我们也曾取出存放在-80℃冰箱的细胞，半年还有30%~50%的细胞有活性，但一年的细胞就没有活的。冻存要求发生改变，因为冻存细胞要进行临床应用。上海正规无血清细胞冻存液销售厂家

无血清细胞冻存液：冻存注意：开盖之前，用70%的乙醇或异丙醇擦拭瓶身。以下说明适用于在6孔板内的培养物的冻存。培养物应该在适合传代的时候进行收集和冻存。每管所含有的细胞应当来源于6孔板的1个培养孔。如果使用其他的培养器皿，请相应的调整体积。1.在室温（15-25°C）以300xg离心5分钟。2.轻轻吸走上清液，注意不要扰动细胞团。3.用血清学吸管以1mL的TBD-698重悬细胞。在打散细胞团时，尽量减少细胞聚集体分解。4.用2mL的血清学吸管将1mL的细胞聚集体转移到标记好的冻存管中。5.用以下方法冻存细胞聚集体:推荐使用缓速降温方法，每分钟降低1度，随后可以在-196°C液氮长期保存。不推荐在-80°C长期保存。逐步降温法：-20°C保存2个小时，然后-80°C中保存2个小时，随后可以在-196°C液氮中长期保存。长沙正规无血清细胞冻存液厂家直销快速冻存即不需要经过梯度降温，直接将细胞放入-80 ℃冰箱24h。

胞冷冻保存方法：选择冻存处于对数生长期的细胞有助于提高复苏细胞存活率。1.按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。2.按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。（参考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（参考离心条件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去离心管中的上清液。4.加入适量的无血清型细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度为5×105至5×106cells/ml。缓慢地混合均匀，制成细胞混合液。5.将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。6.直接将含细胞混合液的冻存管放入-80℃冰箱，长期冷冻保存。7.若研究者需要液氮保存时，可将完全冻结的冻存管（放入-80℃冰箱后至少一昼夜）移至-196℃液氮罐。

产品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱，无需降温，节省时间和精力；b.即用型，无需现配，操作方便，可减少实验中因操作引起的污染；c.在多种哺乳细胞系中经过性能验证，其复苏率和活率达90%以上；d.可长期存储于-80℃冰箱(5年以上)，取用方便；e.采用成分明确的无血清配方，价格比常规自配细胞冻存液更为低廉；保存温度：2~8℃具体操作步骤：1、培养皿或培养瓶中细胞按常规方法消化，或分离获得原代细胞后，收集于离心管中。2、使用离心机离心，去除上清，收集细胞沉淀。3、根据细胞生长密度加入适量的细胞冻存液进行重悬，充分混匀(推荐冻存密度为1-2×106/ml)。4、将细胞悬液分装至冻存管中，直接放置于-80℃冰箱保存。24小时后可移入液氮长期保存(可选)。无血清细胞冻存液的优势：即用型，无需现配，直接将细胞悬浮于冻存液中即可。

无血清细胞冻存液复苏细胞实验步骤：1.从冰箱里取出细胞冷冻保存管，立即放入37℃振动水浴槽中快速解冻。2.待冻存管中细胞混合液完全融化后，立即加入1ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合，再将细胞混合液从冻存管中移入含有9ml该细胞培养基的试管中，混合均匀。3.离心收集培养细胞（参考离心条件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4.清洗细胞，充分洗净残留冻存液。5.加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后，将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。无血清细胞冻存液使用方法：按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。贵阳正规无血清细胞冻存液厂家

细胞冻存管一定要保证完全密封，否则在复苏过程中有可能会炸。上海正规无血清细胞冻存液销售厂家

细胞冻存注意事项：1、细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。2、复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。3、加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。上海正规无血清细胞冻存液销售厂家