仪器维护每次使用后,清洁样品槽内的液滴或杂质(用无尘纸蘸 75% 酒精擦拭),防止腐蚀或影响温度均匀性。长期不用时,定期开机运行空程序,避免部件老化;仪器出现异常(如温度失控、荧光信号异常)时,及时联系维修,勿自行拆解。实验设计合理性对照设置:必须包含阴性对照(已知阴性样本)、空白对照(反应体系,无模板),确保结果可靠性。重复设置:每个样本至少做 3 次生物学重复和技术重复,减少实验误差。循环次数:避免循环次数过多(超过 45 次),否则可能导致非特异性扩增,影响定量准确性。扩增效果优异的柏恒RePure系列PCR仪在PCR实验中能够准确地放大目标DNA片段,提供可靠的实验结果。无锡单槽基因扩增仪PCR仪厂家直销
温度与反应体系控制温度准确性:定期校准仪器(由专业人员进行),确保变性、退火温度精细(偏差超过 ±0.5℃会影响结果)。体系一致性:加样时确保各孔反应体积一致(误差≤1μL),避免因体积差异导致 Ct 值偏差。避免气泡:加样后若有气泡,需轻轻敲击板壁或离心去除,否则气泡会干扰荧光信号采集。3. 试剂与样本处理酶的保存:qPCR Mix 需 - 20℃冷冻保存,使用时冰上融化,轻轻混匀(勿震荡,防止酶变性)。模板质量:避免模板中含 EDTA、SDS 等抑制剂,若样本浓度过低,可适当增加模板量(但需注意体积占比,避免影响反应体系)。江苏48孔基因扩增仪PCR仪厂家供应RePure-A的光学系统经过精心设计,具备高灵敏度与高特异性。
放入 PCR 仪:将配置好的反应管放入基因扩增仪 PCR 仪中,按照设定的程序进行扩增反应。设置扩增程序:一般包括预变性、变性、退火、延伸和终延伸等步骤。预变性步骤通常在 94℃-95℃下进行 5-10 分钟,使 DNA 双链充分解开;变性温度一般为 94℃-95℃,时间为 30-60 秒,使模板 DNA 双链解链;退火温度根据引物的 Tm 值确定,一般在 50℃-65℃之间,时间为 30-60 秒,使引物与模板 DNA 特异性结合;延伸温度通常为 72℃,时间根据扩增片段长度而定,一般为 1-2 分钟 /kb;终延伸步骤在 72℃下进行 5-10 分钟,确保所有扩增产物延伸完整。循环次数一般为 30-40 次。
多重 PCR 与多基因检测场景:同时扩增多个靶基因(如病原体分型、遗传标记检测),需平衡不同引物对的退火温度。例:在 HPV 分型检测中,使用梯度 PCR 优化 14 种型别引物的共同退火温度,避免因单一温度导致部分型别漏检。 科研方法开发与验证场景:建立新的 PCR 检测方法(如巢式 PCR、实时荧光定量 PCR 的预实验)时,需系统优化温度、时间、酶浓度等参数。例:开发某**突变基因的检测方法时,通过梯度功能同时测试 3 个不同退火温度和 2 种酶浓度组合,共 6 种条件,快速确定比较好反应体系。RePure-A也强调节能环保,减少对环境的影响,这使得其在科研机构和高校生物实验室中得到了广泛应用。
仪器操作设置放置样品板:将密封好的 96 孔板平稳放入 qPCR 仪的样品槽,确保孔位对齐,盖紧仪器舱门。程序设置(通过仪器软件):预变性:通常 95℃,30 秒 - 5 分钟(热启动酶,使模板完全变性)。循环阶段(变性→退火→延伸,同时采集荧光):变性:95℃,5-15 秒(使 DNA 解链)。退火 / 延伸:根据引物 Tm 值设置温度(一般 55-65℃),20-30 秒(引物结合并延伸,荧光染料 / 探针在此阶段发光)。循环次数:通常 35-40 次(根据模板浓度调整)。溶解曲线(可选):用于验证扩增产物特异性,程序为 95℃ 15 秒→60℃ 1 分钟→缓慢升温至 95℃,同时连续采集荧光(观察是否有单一峰,排除非特异性扩增或引物二聚体)。荧光通道选择:根据使用的荧光染料 / 探针类型选择(如 SYBR GreenⅠ 对应 FAM 通道,TaqMan 探针根据标记荧光选择)。样本信息录入:在软件中标记样品类型(如标准品、未知样本、阴性对照、空白对照)及孔位对应关系。RePure-(D)B在梯度功能下,可以同时在不同温度进行PCR反应,优化反应条件。江苏QPCR基因扩增仪PCR仪哪个好
RePure-(D)B通过梯度功能优化PCR反应条件,可以将实验过程简化,缩短实验时间,提高实验效率。无锡单槽基因扩增仪PCR仪厂家直销
在保障农产品质量安全、品种改良和动植物疫病防控中应用较广。转基因作物检测:定量检测农作物中转基因成分的含量,判断是否符合相关标准(如我国规定转基因食品需标注,qPCR可精细测定转基因片段的拷贝数)。动植物疫病检测:快速检测畜禽或农作物中的病原体(如禽流感病毒、猪瘟病毒、植物病毒等),实现疫病的早期预警和防控,减少经济损失。品种鉴定与育种:通过分析特定基因的表达量或基因型,鉴定农作物或畜禽的品种纯度,辅助优良品种的选育(如抗虫、抗病品种的筛选)。无锡单槽基因扩增仪PCR仪厂家直销