精子手工计数原理及操作方法
1.原理：将精液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再算出每毫升精液中精子数。2.方法（按照***版第四版《全国临床检验操作规程》）1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。
3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式：精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/ml 精子分析系统较传统的分析法比较，具有速度快、量比性好、准确性高、为临床和科研提供客观的检测依据。绵羊精子分析ALH
CASA可将每个精子的活力按以下分级：（1）前向运动型（PR）：精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动。（2）非前向运动型（NP）：所有其他非前向运动的形式，如精子在较小的范围内运动，精子头部轻微移位或只观察到尾部摆动。（3）完全不动型（IM）：精子完全不动。CASA系统检测的这些参数有一套标准的术语。（1）VCL=曲线速度（mm/s）。精子头沿其实际的曲线，即在显微镜下见到的二维方式运动轨迹的平均速度。检测细胞活力。（2）VSL=直线速度（mm/s）。根据精子头在开始检测时的位置与***所处位置之间的直线运动的时间平均速度。（3）VAP=平均路径速度（mm/s）。精子头沿其空间平均轨迹移动的时间平均速度。（4）ALH=精子头侧摆幅度（mm）。精子头沿其空间平均轨迹侧摆的幅度。以侧摆的最大值或平均数值表示。（5）LIN=直线性。曲线轨迹的直线性。即VSL/VCL。（6）WOB=摆动性。精子头沿其实际轨迹的空间平均路径摆动的尺度。即VAP/VCL。（7）STR=前向性。空间平均路径的直线性。即VSL/VAP。（8）BCF=鞭打频率（Hz）。精子曲线轨迹越过其平均路径轨迹的时间平均速率。（9）MAD=平均移动角度（度）。精子头沿其曲线轨迹瞬间转折角度的时间平均***值。绵羊精子分析ALHCASA系统减少了人为因素对检测结果的影响，提高了检测的客观性和可重复性。
人类精子冷冻保存和储存：增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容，更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议：将样本分管分罐分开储存；对使用的材料和留存标本建立定期核验程序；所有储罐都应有液位监控报警系统，以监测温度和液氮液位，传感器应连接警报器，可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明，玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻，可以防止冰晶的形成，并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中，也可以使用封闭系统，不需要无菌的液氮。
CASA系统进行**分析应注意以下几点：
3.2**分析仪阈值的确定（1）精子灰度、对比度阈值：由于分析仪是根据灰度的高低来判断精子的真伪，对亮度和对比度要求特别高，检测时应多次试用，寻找能准确识别精子的比较好灰度阈值[8]。（2）碎片：测定精子浓度准确性受**中细胞成份和非精子的颗粒物质的干扰，测定活动精子的百分率也受精子中非精子物质的影响[9]，这些也是需要注意的。对于系统误认为精子的非精子成分，如精原细胞、白细胞和非白细胞颗粒等，可人为准确记数后在可删除杂质一栏将其舍去。3.3出现1次异常结果应间隔复查反复检查2�3次方能得出比较正确的结果。3.4对于无精子的患者应仔细进行视野检查注意不要将杂质误认为精子计数在内，应将**3000ɡ离心15分钟后，再涂片检查，确认无精后再出报告。 WHO第6版明确提出：使用CASA系统须遵循适当的程序步骤，才能获得可靠和可重复的结果。
ivos自动精子分析系统
hamiltonthorne的casa系统适用于临床、研究实验室、动物繁殖基地、水产业、制药公司等各种领域，成为了精液分析业的金标准。可以应用于包括人类、公牛、马、、狗、兔子、老鼠、绵羊、山羊、鱼以及各种濒危动物。全自动的ivos可以提供快的分析速度以及高质量数据输出。可以使用一次性的和可重复的载玻片，深度从10um～100um。每次分析捕捉100帧图像，扫描速度每秒60帧。**的软件升级。ivos能提供：、客观、具有重复性的结果高速分析，在60hz下半秒扫描30帧为实验室节省成本。高等级数据安全。（顺应美国fda的操作软件）数据结果包括：计数、浓度。运动以及前进运动三种速度参数vap，vsl和vcl，外加运动参数lin，alh，str和bcf。内置质控保证分析精度可以回放精子活动，标记不同状态精子。迅速根据新的设定对上次分析结果进行重新计算，此过程不会损失画面。形态可选附件：三维严谨形态（人类）：的经过认证的严谨的形态分析。用户自定义形态。即时形态分析荧光可选附件：自定义荧光（只有ivos）可以用滤光片的casa系统。高精度的计数。同时在氙气灯析运动和静止，使用各种荧光染色，自动探测计数染色细胞，自动归类，可选彩色摄像头。 精子分析仪的出现简化了检验流程，提高了诊断的可靠性，对于提升男性生殖健康领域的Z疗效果具有重要作用。绵羊精子分析ALH
精子分析仪参数，平均路径速率（VAP）：精子头沿其平均路径移动时的时均速率。绵羊精子分析ALH
精液一般检查
(1)精液量：正常人一次排精2～5ml。(2)颜色和透明度：正常刚射出的精液呈乳白色或灰白色，液化后呈半透明乳白色，久未排精者可呈淡黄色。鲜红色或暗红色的血精见于生殖系统炎症、结核、和**，黄色脓样精液，见于精囊炎或前列腺炎。(3)粘稠度和液化：正常新鲜的精液排出后数秒呈粘稠胶冻状，在精液中纤溶酶的作用下30分钟后开始液化。如果粘稠度降低呈米汤样，可能是精子数量减少，见于生殖系统炎症，精液不凝固见于精囊阻塞或损伤；如果精液1小时后不液化，可能是由于炎症破坏纤溶酶所致，如前列腺炎，精子不液化可以抑制精子活动力而影响受孕。(4)酸碱度：pH值。正常精液呈弱碱性pH7．2～8．0，以利于中和酸性的阴道分泌物，pH值小于7或大于8都能影响精子的活动和代谢，不利于受孕。 绵羊精子分析ALH
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