由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性,形成了重叠的肽,从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较,相同材料的标准胰蛋白酶消化物, 显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位:OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶,可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽,并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体;湖南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
使用Genovis的GalNAcEXO 对 O-糖基化生物制药进行 Tn 抗原表征:未成熟的截短O-聚糖导致了复杂生物制药的异质性,使其分析更具挑战性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc残基组成,通过糖苷键与丝氨酸或苏氨酸连接,称为Tn抗原。 现在,使用GalNAcEXO可以采用合适的酶策略来去除这些GalNAc并简化生物制药的表征。在质谱图中可以观察到重复峰的模式。其次,在与GalNAcEXO酶孵育后,剩余的GalNAc残基被完全去除,留下一个峰。因此,该工作流程确认了 O-糖基化生物制药上存在 Tn 抗原,并允许定量he心 GalNAc 水平。这种工作流程的另一个好处是减少了剩余的异质性,这有助于确认蛋白质的完整质量,并揭示截短的片段。湖南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究IgA 特异性O-糖肽富集:胰蛋白酶消化IgA。
G0F 抗体在 30 分钟内:半乳糖的存在会影响zhiliao性抗体引发的效应功能,为了研究抗体的作用方式,可能需要彻底去除半乳糖残留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠单抗上使用 30 分钟孵育证明。genovis的GalactEXO Immobilized 由强大的 GalactEXO 酶组成,该酶固定在琼脂糖珠上,并以易于使用的微离心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖残基。使用FabRICATOR®将抗体消化成亚基,并使用LC-MS进行分析。使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变,但后者在z终制剂中没有留下酶。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。
用于水解离心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的 PNGase F 酶,用于在样品中酶峰减少的糖蛋白上水解 N-糖。 将糖蛋白样品与PNGase F一起在离心柱中固定,然后通过离心步骤轻松收集去糖基化的蛋白质。由于空间位阻,PNGase F对某些糖蛋白的活性可能缓慢或受到抑制 - 在这些情况下可能需要更长的孵育时间或糖蛋白变性。 Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3.z终样品中的酶峰减少。将肽和SialEXO的混合物加载到GlycOCATCH树脂上,离心洗涤洗脱和富集O-糖基化肽。
Genovis 集团由瑞典 Genovis AB 和美国全资子公司 Genovis Inc. 组成。该公司的在纳斯达克北方增长市场上市。如需了解更多信息,请访问投资者关系。 Genovis的经营理念是为生物制药和研究行业的客户提供工具,以促进和节省开发新治疗方法和诊断的时间。Genovis 酶产品,称为 SmartEnzymes,被世界各地的科学家使用,创新的产品形式促进了生物药物的开发和质量控制。 通过在2020年收购QED Bioscience,产品组合已扩大到包括用于研究、生物药物开发和诊断检测的抗体和试剂。在 网站 上阅读有关QED的更多信息 Genovis 研发活动的基石是客户关系,使产品开发能够满足客户需求。与专注于表征新酶、开发新工作流程和新靶点抗体的学术团体的合作同样有价值。PNGase F Automation 含有以自动化友好的 96 孔板形式冻干的 PNGase F 酶。湖南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
用SialEXO处理血清,上样于GlycOCATCH,洗涤,洗脱O-糖基化蛋白。Swiss Prot 数据库鉴定蛋白质列表。湖南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR用于携带N-和简单O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 试剂盒包括:OmniGlyZOR 微离心柱;PNGase F 冻干;RapiGest™* SF表面活性剂。除非底物蛋白变性,否则某些 N-糖基化位点很难或无法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在变性条件下使用试剂盒中包含的PNGase F冻干和RapiGest™ SF表面活性剂通过额外的去糖基化步骤去除。使用Genovis的OpeRAT对EPO进行O-糖位点特异性消化:对于jin携带一个或几个 O-糖基化位点的简单底物蛋白,OpeRATOR 也可用于绘制中间水平的 O-糖基化位点。 湖南PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究
对Genovis的ImpaRATOR处理的样品的分析表明,ImpaRATOR很好地消化了所有三种底物...
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【详情】在抗体药物及核酸药物领域,倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程,主要用——RNA转染试剂、生物活性物质...
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