现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是很好也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。检测:PCR反应扩增出了高的拷贝数,下一步检测就成了关键。荧光素(溴化乙锭,EB)染色凝胶电泳是很常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的,因此引物两聚体等非...
查看详细 >>聚合酶链式反应的试验污染:PCR反应的很大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人脑袋不适的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 污染原因:标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样污染导致标本间污染;...
查看详细 >>血清的保存应该注意:血清中的沉淀物、絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量,可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理,显微镜下"小黑点"。经过热处理过的血清,沉淀物的形成会明显增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染,一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,...
查看详细 >>膜片钳技术及其应用:它是作者在\"膜片钳技术及其应用\"领域所进行的研究工作的总结,同时也吸取了国际上的先进技术和新近的研究成果。内容包括:细胞电生理与膜片钳技术,膜片钳系统的组建及实验技术概要,膜片钳放大器原理与低噪声设计,单通道和全细胞电流记录技术,数据采集和分析,细胞分泌活动的膜电容监测技术和安培测量技术,细胞内钙离子浓度的测量及钙...
查看详细 >>如何挑选适合细胞生长的血清?原代或是正常细胞株建议使用BI特级胎牛血清,对生长条件要求高的细胞和干细胞可选用所用特级胎牛血清,或胚胎干细胞所用胎牛血清。由于血清有批间差异,细胞种类不同,我们建议客户购买前可先申请试用样品,通过筛选得到满意的血清批号,之后根据项目需求可进行批量囤货,以保证该项目所需血清质量的一致性,可排除不同批号血清对于实...
查看详细 >>基于聚合酶链反应的遗传(或脱氧核糖核酸)指纹图谱协议的发展已在法医学中得到较广应用:遗传指纹以其辨别力的形式,可以从世界上所有人群中独特地区分任何一个人。微小的DNA样本可以从犯罪现场,和比较的从嫌疑人那里,或者从DNA资料库早期的证据或罪犯。这些测试的简单版本通常用于在刑事调查中快速排除嫌疑人。几十年前的犯罪证据可以被检验,确认或免责很...
查看详细 >>在体光纤成像记录相干断层扫描的局限性是单能扫描生物组织表面下1-2毫米的深度。这是由于深度越大,光线无散射的射出表面的比例就越小,以至于无法检测到。但是在检测过程中不需要样品制备过程,成像过程也不需要接触被成像的组织。更重要的是,设备产生的激光是对人眼安全的近红外线,因此几乎不会对组织造成伤害。使用光学反向散射或后向反射的测量成像组织的内...
查看详细 >>在体光纤成像记录进行小动物显像,首先是利用医用回旋加速器发生的核反应,生产正电子放射性核素,通过有机合成、无机反应或生化合成制备各种小动物正电子显像剂或示踪物质。显像剂引入体内定位于靶系统,利用显像仪采集信息显示不同断面图并给出定量生理参数。具备优异的特异性、敏感性和能定量示踪标记物;所使用的放射性核素多为动物生理活动需要的元素,因此不影...
查看详细 >>在体光纤成像记录的应用作为一项新兴的分子、 基因表达 的分析 检测技术, 在体生物光学成像已成功应用于生命科学、 生物医学、 分子生物学和药物研发等领域, 取得了大量研究成果, 主要包括:在体监测坏掉的的生长和转移、 基因疗于中的基因表达、 机体的生理病理改变过程 以及进行药物的筛选和评价等,利用在体生物光学成像技术, 通过荧光素酶或绿色...
查看详细 >>膜片钳实验常见问题及解决方法:膜片钳技术是电生理记录的常用手段,目前在科学研究中使用越来越普遍。但在具体膜片钳实验操作的过程中,总会遇到各种各样的问题,对实验人员造成很多困扰。本次讲座主要从实验角度出发,以简单,实用的原则,着重讲解实验中遇到的各种问题,以及解决方法。从选择实验样本开始,按照一般实验进行的顺序,逐步延伸,一直到如何搭建自己...
查看详细 >>在体光纤成像记录药物代谢相关研究,标记与药物代谢有关的基因,研究不同药物对该基因表达的影响,从而间接获知相关药物在体内代谢的情况。在药剂学研究方面,可通过把荧光素酶报告基因质粒直接装在载体中,观察药物载体的靶向脏器与体内分布规律。在药理学方面,可用荧光素酶基因标记目的基因,观察药物作用的通路,免疫细胞研究:标记免疫细胞,观察免疫细胞对坏掉...
查看详细 >>在体光纤成像记录的根本缺点是光的组织穿透率低。由于吸收和散射,荧光发射的可见光谱中的光只能穿透几百微米的组织。这个问题限制了大多数光学方法在小动物或人类表面结构研究中的应用。使用近红外光谱能够提高信号的组织穿透能力,并能降低了组织的自体荧光。在体外将荧光探针与细胞共孵育后注射入体内,用规定波长的光激发荧光探针,较后用高灵敏度的摄像机记录发...
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