电子探针又称微区X射线光谱分析仪、X射线显微分析仪。其原理是利用聚焦的高能电子束轰击固体表面,使被轰击的元素激发出特征X射线,按其波长及强度对固体表面微区进行定性及定量化学分析。主要用来分析固体物质表面的细小颗粒或微小区域,**小范围直径为1μm左右。分析元素从原子序数3(锂)至92(铀)。***感量可达10-14至10-15g。近年形成了扫描电镜-显微分析仪的联合装置,可在观察微区形貌的同时逐点分析试样的化学成分及结构。广泛应用于地质、冶金材料、水泥熟料研究等部门。如图《电子探针示意图》所示。1953年前苏联制成了X射线微区分析仪,以后英、美等国陆续生产。静安区标准探针按需定制
②随机引物法。随机引物是指含有各种可能排列顺序的寡聚核苷酸片断的混合物,因此它可以与任意核苷酸序列杂交,起到聚合酶反应的引物作用。将待标记的DNA探针片断变性后与随机引物一起杂交,然后以此杂交的寡聚核苷酸为引物,在大肠杆菌DNA聚合酶I大断段(KlenowFragment)催化下,合成与探针DNA互补的DNA链,当在反应体系中含有a-32P-dNTP时,即形成放射性同位素标记的DNA探针。具有上述优点,可代替缺口平移法。此外大小、单双DNA均可标记,标记均匀,标记率高,但也不能标记环状DNA。随机引物法标记探针一般长400~600bp。杨浦区品牌探针按需定制能进行微区分析。可分析数个μm3内元素的成分。
(3)X射线强度测量系统。特征X射线,由B系统中的计数管接收,并转换成电脉冲,通过脉冲高度分析仪、计数率计、定标器、电子电位计将其强度测量出来。(4)光学显微镜目测系统。用以准确选择需要分析的区域,并作光学观察。(5)背散射电子图像系统。(6)吸收电子图像系统。(7)特征X射线图像系统。电子探针的技术**是利用X射线晶体光学,主要应用两种方法:1)晶体衍射法(X射线光谱法)。利用晶体转到一定角度,来衍射某种波长的X射线,通过读出晶体不同的衍射角,求出X射线的波长,从而定出样品所含的元素。
探针的标记方式有放射性标记和非放射性标记。标记物质有放射性元素(如32P等)和非放射性物质(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸标记同位素,被标记的dNTP本身就带有磷酸基团,便于标记。特点是比活性高,可达9000Ci/mmol;发射的β射线能量高。用它标记的探针自显影时间短,灵敏度高。32P的半寿期短,虽使用不方便,但为废弃物的处理减轻了压力。非放射性标记法有酶标法和化学物标记法。酶标方法与免疫测定ELISA方法相似,只是被标记的核酸代替了被标记的抗体,事实上被标记的抗体也称为探针,现有许多商品是生物素、地高辛标记的。探针卡应用在IC尚未封装前,针对裸晶系以探针做功能测试,筛选出不良品、再进行之后的封装工程。
在原核表达系统中外源基因不仅进行正向转录,有时还存在反向转录(即生成反义RNA),这种现象往往是外源基因表达不高的重要原因。另外,在真核系统,某些基因也存在反向转录,产生反义RNA,参与自身表达的调控。在这些情况下,要准确测定正向和反向转录水平就不能用双链DNA探针,而只能用RNA探针或单链DNA探针。探针是能与特异靶分子反应并带有供反应后检测的合适标记物的分子。利用核苷酸碱基顺序互补的原理,用特异的基因探针即识别特异碱基序列的有标记的一段单链DNA(或RNA)分子,与被测定的靶序列互补,以检测被测靶序列的技术叫核酸探针技术。探针制备就是将目的基因进行标记。光学显微镜目测系统。用以准确选择需要分析的区域,并作光学观察。杨浦区品牌探针按需定制
除H、He、Li、Be等几个较轻元素外,还有U元素以后的元素以外都可进行定性和定量分析。静安区标准探针按需定制
电子探针仪镜筒部分的构造大体上和扫描电子显微镜相同,只是在检测器部分使用的是X射线谱仪、专门用来检测X射线的特征波长或特征能量,以此来对微区的化学成分进行分析。因此,除专门的电子探针仪外,有相当一部分电子探针仪是作为附件安装在扫描电镜或透射电镜镜筒上,以满足微区组织形貌、晶体结构及化学成分三位一体同位分析的需要 [1]。用波长色散谱仪(或能量色散谱仪)和检测计数系统,测量特征X射线的波长(或能量)和强度,即可鉴别元素的种类和浓度。静安区标准探针按需定制
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