功能:当外泌体在1980年初次被发现后,其被认为是细胞排泄废物的一种方式,如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、一些病症侵袭等方方面面。有研究表明一些病症来源的外泌体参与到一些病症细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了一些病症的生长与侵袭。外泌体的提取、分离方法:开发高效、快速、稳定,并且保持外泌体结构和生物功能完整性的方法。正规外泌体提取试剂哪家好
外泌体可通过流式、WB(检测指标有CD9,CD63,CD81)、电镜观察、NTA粒径追踪等手段检测,普遍应用于药物载体、疾病诊断marker、精细医疗、一些病症治病等方面研究。由于外泌体直径小,样本含量低,提取十分困难。已有的外泌体分离方式有密度梯度离心、超滤离心法、免疫磁珠抗体捕获、商用试剂盒等。但到目前为止,仍没有一种提取方法能同时保证外泌体的含量、纯度以及生物活性。外泌体是细胞间进行物质运输和信息交流的重要工具,可以通过调节免疫功能促进一些病症的增殖,血管新生和一些病症转移。与细菌传染,帮助细菌逃避免疫关系很大,并与心血管疾病,老年痴呆等疾病具有密切关系。宁波正规外泌体提取试剂厂家批发价同时可获得高纯度和高回收率的外泌体——如新西兰IZON开发的系列的外泌体排阻剂。
外泌体的提取、分离方法:微流控技术。微流控是利用微纳米级尺寸的管道来处理和操控流体所涉及的一门技术,其在外泌体分离方面的应用受到越来越多学者的关注。Jie等[16]课题组开发了一种三维纳米结构微流控芯片,微柱阵列通过化学沉积将交叉多壁碳纳米管功能化,然后其就可以识别特定的分子(CD63)并利用独特拓扑纳米材料高效的捕获外泌体。Wunsch等[17]利用硅工艺生产纳米级确定性侧向位移(Nano-DLD)芯片,得到了均匀的间隙尺寸,该芯片可以灵敏地将20~110nm的颗粒分离。该研究证明了外泌体基于大小的位移,从而揭示了利用芯片分选和量化纳米级生物胶体的潜力。
用于外泌体提取的体液收集注意事项:1、选择血清还是血浆?推荐大多数研究选择血浆。血液凝固过程中血小板会产生大量外泌体,含量占血清中外泌体的50%以上,选择血浆可避免不必要的影响。2、注意抗凝剂的选择。肝素类抗凝剂与PCR假阴性有关,这可能是因为肝素与引物和/或酶有竞争作用。除了克制PCR,肝素可以与外泌体结合,阻止细胞摄取外泌体。因此需要记录肝素类药物的患者的血液样本。EDTA和双嘧达莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的并克制其释放外泌体。EDTA可能会干扰PCR反应(尽管其程度小于肝素),但是还是优于其他选择。此外,有研究表明钙螯合剂可在体外促进外泌体与血小板的结合从而降低经EDTA、或柠檬酸盐处理后的血液样本中外泌体的表观数量。外泌体提取:密度梯度离心。
外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。关于外泌体的提取有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等,然而各种方法均有其利弊。超速离心法是目前外泌体相关文章中的主流方法,由于离心步骤繁琐,费事费力,而且步骤多导致实验中容易污染,且损耗量大,使得较终回收的外泌体不稳定。而且对于抽提细胞上清来说,更是极为不请便,试想用提取300ml的上清需要6个50ml离心管,无论是过滤还是后续的每一步的离心去沉淀,都具有操作极其不便的缺点,总之非常麻烦。而超滤法存在外泌体会堵塞膜孔,造成浓缩效率低,浓缩管重复利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌体还可能会粘连成团,造成损失及较后的数据有误差,对于后续实验也有影响。用于外泌体提取的体液收集注意事项:注意抗凝剂的选择。南昌正规外泌体提取试剂哪家好
不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。正规外泌体提取试剂哪家好
外泌体的提取的方式:1、免疫磁珠法,这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性,不便进行下一步的实验。2、PS亲和法,该方法将PS(磷脂酰丝氨酸)与磁珠结合,利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似,获得的外泌体形态完整,纯度较高。由于不使用变性剂,不影响外泌体的生物活性,外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9《ScientificReports》杂志发表了该方法较新数据,表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。六是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。正规外泌体提取试剂哪家好
外泌体(Exosome)是细胞主动分泌的囊泡样小体,大小均一,直径30-200nm,密度1.10-1.18g/ml,来源普遍,几乎所有细胞都可分泌,在血液,尿液,唾液,脑脊液,腹水,乳汁等体液中普遍分布。外泌体较早在1986年发现于培养的绵羊红细胞上清液中。1996年,研究者发现外泌体作为抗原呈递因子参与T细胞依赖的抗一些病症反应,开启了外泌体蛋白研究的新天地。2013年诺贝尔生物/医学奖解答了细胞如何组织其内部较重要的运输系统之一——囊泡传输系统的奥秘。超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受?欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定,纯度也受到质疑。外泌体的提取方法:超速离心法(差速离心)。...