数字PCR也叫DigitalPCR(dPCR),是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说,数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值,不受扩增效率的影响,能够直接读出DNA的分子个数,能够对起始样本核酸分子***定量。数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份,然后再将其分配到不同的反应单元中,使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子(即DNA模板),每个单元都会对目标分子进行扩增,然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。相对而言,传统PCR或qPCR反应都是发生于同一体系当中,这也是数字PCR与其比较大的区别。 浚和(上海)仪器科技有限公司力于提供数字PCR ,有想法的不要错过哦!四川应用广数字PCR电话
dPCR的基本原理目前dPCR主要有两种形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中,每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后,有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号,没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积,就可以推算出原始溶液的核酸浓度。可以使用几种不同的方法来分配样品,包括微孔板,毛细管,油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量,根据泊松分布的原理,反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算,从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。西藏易操作数字PCR安装数字PCR ,就选浚和(上海)仪器科技有限公司。
CNV(CopyNumberVariations,拷贝数变异)研究需要极高的定量精度以区别不同拷贝数之间的微小差异,测序方法适用于高于30%的变异率检测,而qPCR的比较**辨在1.5倍左右,数字PCR通过直接计数目标基因与参照基因(拷贝数为1的基因,例如RNaseP)的数目, 计算比值,直接得到目标基因的拷贝数可以达到极高的拷贝数分辨精度。除此之外,dPCR在病原微生物检测、microRNA研究、基因表达研究、NGS测序文库的***定量、表观遗传学直接相关的DNA甲基化定量检测、ChIP定量鉴定等领域的应用都令人极为期待,而在转基因成分鉴定、分子标准品精确定量、环境样本检测等具体的应用方向上,已经有大量实验数据和结果证明了dPCR技术的优良性能。
精细诊断是精细医学的关键环节,液体活检作为一种无创、均一的检测技术,迅速成为精细诊断领域的新星,2015年被《麻省理工大学科技评论》评选为年度 突破技术,2017年入选世界经济论坛评出的全球 新兴技术,引发了全球科研、临床和产业界的极大热情,已在**、产前诊断、***移植等疾病领域***被应用。数字PCR技术与高通量的二代测序技术,共同组成液体活检领域的两大利器;数字PCR技术是公认的液体活检领域灵敏度比较高的检测方法,采用有限稀释的方法将目标分子分割到 的反应体系中,在不依赖标准曲线条件下实现靶标***定量检测,能检测低至0.01%的突变基因;Bio-Rad及ThermoFisher目前是这一领域的主导者,分别采用微滴或芯片方式将样本分割成两万份,MiniDrop™创新性采用高压驱动的方法将样本分割成50万份,打破了国外厂商在微滴式数字PCR领域的垄断。数字PCR ,就选浚和(上海)仪器科技有限公司,有需要可以联系我司哦!
数字PCR(DigtalPCR)是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段,源于于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中,使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时,加入可检测荧光。待扩增结束时,使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数,从而定量检测样本中的核酸浓度。基于分液方式的不同,数字PCR主要分为3种:微流体数字PCR、微滴数字PCR和芯片数字PCR,数字PCR仪器目前是市场测试校准高的。浚和(上海)仪器科技有限公司是一家专业提供数字PCR 的公司,欢迎新老客户来电!浙江应用广数字PCR维修
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数字PCR(DigitalPCR-dPCR)技术是一种新的核酸检测和定量方法,与传统定量PCR(qPCR)技术不同,数字PCR采用***定量的方式,不依赖于标准曲线和参照样本,直接检测目标序列的拷贝数。由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性,dPCR迅速得到***的应用,这项技术在极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面变现出的优势已被普遍认可,而其在基因表达研究、microRNA研究、基因组拷贝数鉴定、**标志物稀有突变检测、致病微生物鉴定、转基因成分鉴定、NGS测序文库精确定量和结果验证等诸多方面具有的广阔应用前景已经受到越来越多的关注。四川应用广数字PCR电话
无创产前检查镰状细胞贫血(sicklecellanemia)是HBB基因突变引起的常染色体显性遗传病,有严重的危害,可以导致高达5%的胎儿死亡率及4.62%的孕妇死亡率。而精细有效的无创产前诊断是预防镰状细胞贫血患儿出生的有效方法。研究人员采用dPCR技术检测孕妇胎儿 游离DNA(cff-DNA)HBB基因突变。结果显示,dPCR技术能够确定87%的男性胎儿(n=45)和75%的女性胎儿(n=20)HBB基因的突变状态。当cff-DNA浓度大于7%时,可以**的检测出HBB基因突变[3],可以说是相当厉害了。浚和(上海)仪器科技有限公司力于提供数字PCR ,有想法可以来我司咨询。新疆精密数字P...